荧光是生物和分析显微镜中常用的物理现象之一,主要是因为它具有灵敏度高、特异性强的特点。当高能量短波长的光线激发某种物质时,高能量的光子与物质中电子碰撞,使得电子从基态跃迁到激发态。激发态的电子不稳定,会回落到基态,这个过程中会消耗部分热能,并发出新的光子。新的光子能量比激发的光子能量低,因此波长更长。这就是荧光效应,也就是徕卡显微镜看到的荧光图像的原理。
徕卡显微镜在使用时需要根据滤色片镜组的激发光谱特性选择合适的荧光染料,允许用户决定单个分子种类的分布、数量及其在细胞内的位置,可以实现共区域化和相互作用的研究,离子浓度以及观察细胞内间的胞吞和胞吐过程,可以成像亚分辨率结构。
今天咱们来了解下徕卡显微镜中激光镜可选择的聚光器都有什么区别:
1、明视野聚光器
一般多用明视野聚光器,它具有聚光力强,使用方便,特别适于低、中倍放大的标本观察。
2、暗视野聚光器
暗视野聚光器在该设备中的应用日益广泛。因为激发光不直接进入物镜,因而除散射光外,激发光也不进入目镜,可以使用薄的激发滤板,增强激发光的强度,压制滤板也可以很薄,因紫外光激发时,可用无色滤板(不透过紫外)而仍然产生黑暗的背景。从而增强了荧光图像的亮度和反衬度,提高了图像的质量,观察舒适,可能发现亮视野难以分辨的细微荧光颗粒。
3、相差荧光聚光器
相差聚光器与相差物镜配合使用,可同时进行相差和荧光联合观察,既能看到荧光图像,又能看到相差图像,有助于荧光的定位准确。一般荧光观察很少需要这种聚光器。